本路線為提供落馬洲（新田）公共運輸交匯處往來深圳（皇崗口岸）的過境巴士服務，由新香港巴士有限公司（載通國際全資附屬公司）及新福港合資各佔五成股權，於1997年3月20日起投入服務。本路線是拖延了一年才開辦，因為涉及中港兩地政策，包括外勞條例、出入境人數限額、口岸開放時間、及兩地的交通配套。最後，車長和其他工作人員由深圳派出，但車長要像一般乘客辦理出入境手續。

本路線主要方便元朗及北區居民，有另一個陸路途徑往來深圳，也為繁忙的羅湖口岸起分流作用。開辦初期，由於經由落馬洲過境未被受落，客量只屬一般，隨著港人北上成風，中港客貨運急速發展，而羅湖口岸又早已經日趨飽和，因此本路線的客量不斷上升，特別是週末、假日及大節日，更出現供不應求的情況，本路線便不斷增加車輛行走。

初時於每日0700-2100提供服務，2003年1月27日凌晨起，配合皇崗口岸全日24小時通關，本路線更延長服務時間至24小時行走，是世界上少數班次頻密的跨境巴士路線之一，亦是首條接受八達通繳費的跨境巴士路線。2004年政府加強規管來往皇崗口岸與香港市區的「跑狗」點對點過境巴士服務，令皇巴士客量再創新高，2006年逾1800萬人次。可惜好景不常，2007年深圳灣及落馬洲支線（福田）兩個新陸路管制站相繼啟用，後者更設有鐵路服務直達港九市區。相比之下皇巴士只能到達新田，乘客需要前往上水或元朗，再轉乘其他交通工具才能到達市區。自此，皇巴士對乘客吸引力大減，客量持續下跌。皇崗口岸於2011年7月搬遷，使旅客需要前往更遠的地點辦理出入境手續，加上港深口岸增多，皇巴士服務需求進一步下跌。因應新型冠狀病毒疫情，落馬洲管制站的旅客檢查服務由2020年2月4日凌晨零時起暫停，本路線由當日起暫停服務，直至2023年2月6日恢復。由於同日香園圍口岸的客運部份正式啟用（貨運部份早於2020年8月26日啟用），在港深口岸選擇進一步增加之下，本路線客量將進一步受壓。

初時由十輛配Northern Counties (NC) 車身的Dennis Dart行走，有五輛曾經服役於九巴224X線，後來因客量不斷上升，由2001年起引入多款全新車款，包括猛獅MAN NL263（葡萄牙Salvador Caetano及馬來西亞順豐Gemaling車身，分別於2001年及2007年引入）、富豪B7RLE及Scania L94UB低地台單層空調巴士（於2003年引入），其中後者更是香港首次出現兩邊車身均有車門的巴士車款。2010年，因皇巴士原有的Dennis Dart車隊年事已高，皇巴士向猛獅訂購9輛猛獅MAN 18.320，以取代皇巴士原有的Dennis Dart車隊，切合車務及乘客的需要，同時提升車隊的運載能力，亦令皇巴士車隊開始正式全面低地台化。

早年因皇巴士的車身是黃色，因此常被稱為「黃巴士」（亦是當年一本暢銷的兒童雜誌名稱）。後來到2003年後，有關公司和傳媒陸續把「黃巴士」改稱同音的「皇巴士」或「皇巴」，相信是取其來往皇崗之意。本路線亦是獲特准無須內地車牌而可進入深圳境內的巴士路線之一。展望將來，隨著新皇崗口岸將於2025年底落成，並實施「一地兩檢」，舊有的皇崗口岸拆卸，落馬洲管制站亦同時停用，屆時過境旅客毋須經皇巴士接載穿梭兩個口岸，營運逾26年的皇巴士即將完成歷史任務。

收費情況：

1. 起步價（首2公里）為10.00元。
2. 超過2000米，每公里收取2.60元。
3. 等候時間每分鐘0.80元。

附加規定：
1. 紅色的士乘客需在計價器金額以外另加燃油附加費，其價格隨汽油價格變化而變化，具體請參照的士車內標籤公告。藍色的士乘客則免支付燃油附加費。
2. 乘客攜帶電視機、風扇等大件物品，每件加收0.50元。
3. 提供的士電召服務的，每車次加收2元。
4. 每日0600-2300，計程第25至50公里開始，每公里加收30%的返程費，第51公里起則每公里加收60%的返程費。
5. 每日2300-0600，按白天價格的起步價和公里價的30%加收。
6. 經過合法批准收費的路段或設施（包括過橋、過路、過渡、過隧道等）的費用由乘客支付。