本路線提供澳門本島筷子基、沙梨頭、內港碼頭、司打口、下環、媽閣、澳門旅遊塔往來氹仔（海洋花園、氹仔舊城區、湖畔大廈、氹仔客運碼頭、澳門國際機場、科技大學）及路環（路氹邊檢大樓、石排灣公屋群、石排灣郊野公園、路環市區）的巴士服務，回程途經白鴿巢及鏡湖醫院，前身為21線，於1975年6月16日起配合首條連接澳門本島至氹仔的陸路大橋－－嘉樂庇總督大橋通車而投入服務，初時往來澳門總站（大約即現時內港碼頭）至路環，由新福利前身「福利巴士」及澳巴前身「海島市公共汽車公司」合營，福利公司當時更派出雙層巴士行走。

1988年起，澳巴及新福利將路線分家，兩家公司當時仍稱為21線，1994年起因應澳門本島北區發展迅速，新福利將其營運的部份延長至筷子基作總站，又因本路線以往號碼21與澳巴另一路線（於2011年8月1日巴士專營權重整當日停辦）相同，為避免混淆，故更改編號為26線（即本路線）。

2006年2月1日起，來回程改經司打口、下環、媽閣、西灣大橋及海洋花園，不再經新馬路及嘉樂庇總督大橋。2008年12月7日起配合澳門特區政府交通事務局實施第一階段巴士路線調整，總站遷往沙梨頭北街／筷子基北灣。2011年8月1日澳門特區政府交通事務局實施巴士專營權重整，本路線是少數沒有更改營運商的澳門巴士路線。配合首個由澳門特區政府全資興建的經濟房屋項目「湖畔大廈」落成入伙，本路線於2012年12月18日起繞經該處，方便該區居民往來澳門本島。2013年3月26日起配合路環北部石排灣公屋社區落成入伙，來回程均繞經該社區，成為首批服務石排灣公屋社區的公共巴士路線之一。

另外，初時每逢夏季期間，本路線總站延長至黑沙海灘，但隨著同樣往來黑沙海灘的26A線加強服務，2006年起改為袛於暑假期間延長路線至黑沙海灘，2008年暑假起不再提供該項延長路線服務。

由於本路線行走的部份路段（如白鴿巢及東望洋一帶）路面狹窄，加上路環總站不能容納大型巴士掉頭，初時只能採用小型巴士行走，主力車隊為三菱Rosa雙門小巴（R）。其後，新福利於2017年購入海格KLQ6960GQE5 9.8米低地台中型巴士（編號定為K376-K390，其後再加訂10部K391-K400），是繼2009年後新福利再次引入中型巴士車款。由於澳門於2017年8月23日遭受超強颱風「天鴿」吹襲導致嚴重水浸，新福利超過40%巴士車款遭受水淹而損壞，加上新學年即將開學，在車源緊張下，新福利及澳門交通事務局決定加快該款巴士引入，本路線因而於同年9月4日起，全線改派該款巴士行走，成為首條採用低地台巴士而途經沙欄仔、白鴿巢一帶的巴士路線。2021年1月4日起，配合澳門交通事務局與新福利簽訂的《道路集體客運公共服務—第三標段》的批給合同修訂本於三日前（1月1日）生效，本路線改用大型巴士行走。

值得一提，本路線是各條澳門至氹仔、路環巴士路線當中，唯一一條直達白鴿巢公園、鏡湖醫院及新橋區的路線，也是四條現時行經西灣大橋的巴士路線之一（另三條為新福利「澳氹快線」MT4線、澳巴55線及通宵線N3線）。由於本路線在氹仔區走線迂迴，單程全程行車里數達22.8公里，為全澳門行車里數最長的巴士路線，兩邊巴士站總數共73個，與澳巴21A線並列全澳門兩條擁有最多巴士站的路線之一。另外，本路線亦是唯一一條使用新福利不同類型巴士行走過的路線（18米超長掛接大巴除外）。

筷子基北灣開，經：
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路環街市開，經：
恩尼斯總統前地，田畔街，石排灣馬路，和諧大馬路，樂居大馬路，蝴蝶谷大馬路，和諧廣場，石排灣圓形地，路氹連貫公路，蓮花圓形地，蓮花路，蓮花圓形地，路氹連貫公路，路氹連貫公路圓形地，偉龍馬路，氹仔客運碼頭，偉龍馬路，飛機場圓形地，偉龍馬路，信安馬路，高勵雅馬路，雞頸馬路，美副將馬路，亞利雅架圓形地，奧林匹克大馬路，運動場圓形地，柯維納馬路，盧伯德圓形地，海洋花園大馬路，海洋大馬路，東亞運圓形地，西灣大橋，西灣湖廣場，西灣湖景大馬路，河邊新街，比利喇馬忌士街，火船頭街，巴素打爾古街，花王堂斜巷，連勝街，鏡湖馬路，罅些喇提督大馬路，沙梨頭南街及沙梨頭北街。